(1)定期校正调试、科学使用移液枪。选用250 μL和10 μL可调移液枪,将枪嘴先用清水冲洗再用纯净水冲洗,在电子天平上进行吸液量校正。移液器使用时,必须遵循器具专用原则:吸取酶、显色剂、底物的移液器贴上专用标签,移取试剂时一一对应使用。
(2)检测室温度要控制在20~25 ℃,否则会影响酶的活性,影响结果。若完成对照测量后,仪器关机重启,则需重新测量对照。进行对照测量时,1 min后对照吸光度变化值应在0.15以上,否则该酶试剂不能继续使用。
(3)样液制备过程中,浸提要充分,缩短时间对结果影响较大。酶试剂和样品液或缓冲液的混合液静置反应时间为10 min,反应时间不同,结果不同。试剂从冰箱取出,先恢复至室温,摇匀后再使用。酶、显色剂和底物不能漏加或多加,否则对结果影响大。试剂使用时,必须遵 循只出不进原则:从酶、显色剂、底物试剂瓶中移取出的试剂,不得返回原试剂瓶中,以免污染原试剂[5]。若被测比色杯中有气泡产生,应排除,以免影响测量 结果。
(4)测量结果抑制率A%为“----”,表示测量结果无效。可能由以下几个原因造成:试剂从冰箱取出后,未恢复到室温进行对照测试;对照测 试时间与样品测试时间相隔太久,导致光照与样品测试温度条件相差较大;被测样品色素干扰较严重;反应试剂取用量是否准确。另外,其他非测试孔空白的孔位可 能也会出现“----”。仪器操作时,注意托盘上的孔位不能有头发、棉丝等其他异物,如有污物或液体可用过滤纸擦干净,以免影响光路测量。应做好抽样单、检测结果等原始记录的整理并保存好。
(5)抑制率≥50%的样品,至少要重复检测2次,才能确定此样品是否合格。葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、蘑菇及番茄汁液中,含有对酶有 影响的植物次生物质,容易产生假阳性。处理这类样品时,可采取整株(体)浸提,避免次生物质干扰。若浸提液色素干扰严重,将浸提液移到另一个烧杯中,加入 0.1~0.5 g活性炭,振荡3 min,用吸管吸取上层液至离心管,离心到上层液清澈后取出,放在离心管架上作为样液。
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