怎样鉴定梨黑斑病病原菌?

1.病原菌的形态：用解剖针蘸蒸馏水挑取病部黑绿色霉状物，放到载玻片上的灭菌水滴中，拨匀，盖上盖玻片后在光学显微镜下观察，可以看到病菌的分生孢子梗为褐色或黄褐色，数根至l0余根成束丛生，少数有分枝。分生孢子梗基部较粗，先端略细，有隔膜3～l0个，大小为40～70微米×4.2～5.6微米，其上端有孢痕。分生孢子形状不一，多数近纺锤形，基部膨大，顶端细小，往往有较长嘴胞，有横隔膜4～11个，纵隔膜0～9个，隔膜处微缢缩，大小为10～70微米×6～22微米。老熟的分生孢子壁较厚，暗褐色，幼嫩的分生孢子壁较薄，呈黄褐色至暗黄色。根据病菌形态特点，鉴定为半知菌亚门真菌，细链格孢菌[Alternaria alternata (Fr.)Keissler．]。
2.病原菌的培养性状：病菌在PDA培养基上生长良好，菌丝生长茂盛，开始时乳白色，不久呈灰绿色，有黑色色素沉积。生长最适温度为25℃～30℃，最高36℃，最低10℃～ 12℃。最适pH值5．9。在5℃左右病菌也能缓慢地生长，所以梨果在贮藏期病斑也能缓慢发展。病菌孢子形成的最适温度与菌丝发育最适温度基本相同，荧光灯照射可促进产孢。病菌发芽最适温度为28℃～32℃。5℃经5～10分钟病菌失去发芽能力。
对梨黑斑病病原菌链格孢菌生物学特性的研究结果表明：不同菌株在PSA 平板上培养，平均日生长速率、产孢量、菌落颜色以及菌落厚度有显著不同。病原菌生长适宜温度为20～30℃， 最适温度为28℃， 孢子萌发的最适温度为28℃；病原菌适宜生长相对湿度为50%～100%，最适生长相对湿度为98%～100%，孢子萌发必须具备相对湿度98%以上的高湿条件， 在水滴中萌发率最高；病原菌菌丝适宜生长的pH 值为4～12，最适生长pH 值为7～8，孢子萌发最适pH 值为7～8， 病原菌培养一段时间后培养基的pH 值会发生改变。该病原菌对多种单糖、双糖和多糖等碳源及有机氮、无机氮均可利用，最适碳源为蔗糖，最适氮源为蛋白胨，硫酸胺和氯化胺会抑制病原菌菌丝生长。
3.病原菌的致病机制：病菌在致病过程中能产生寄主特异性毒素AK和寄主非特异性毒素。其中前者仅对感病性品种起作用，后者对各种品种均起作用。AK毒素在孢子发芽的芽管内形成。其中又分为AK特异性毒素I和Ⅱ。寄主特异性毒素对寄主细胞起作用，可使细胞膜透性增加，原生质膜凹陷、崩溃，电解质消失，原生质流动停止，使寄主细胞失去对病菌侵入的抵抗能力。不同的菌株其病原性、产生毒素能力及生理特性略有不同，但寄主特异性毒素的作用和病原性基本一致。