1.1.1 样品的选择
用于病毒分离、鉴定的样品以发病动物(牛、羊或猪)未破裂的舌面或蹄部,鼻镜,乳头等部位的水泡皮和水泡液最好。对临床健康但怀疑带毒的动物可在扑杀后采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。
1.1.2 样品的采集和保存
水泡样品采集部位可用清水清洗,切忌使用酒精、碘酒等消毒剂消毒、擦拭。
1.1.2.1 未破裂水泡中的水泡液用灭菌注射器采集至少1毫升,装入灭菌小瓶中(可加适量抗菌素),加盖密封;尽快冷冻保存。
1.1.2.2 剪取新鲜水泡皮3~5克放入灭菌小瓶中,加适量(2倍体积)50%甘油/磷酸盐缓冲液(pH7.4), 加盖密封;尽快冷冻保存。
1.1.2.3 在无法采集水泡皮和水泡液时,可采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品3~5克装入洁净的小瓶内, 加盖密封;尽快冷冻保存。
每份样品的包装瓶上均要贴上标签,写明采样地点、动物种类、编号、时间等。
1.2 牛、羊食道-咽部分泌物(O-P液)样品
1.2.1 样品采集
被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时,以免反刍胃内容物严重污染O-P液。采样探杯在使用前经0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠浸泡5分钟,再用自来水冲洗。每采完一头动物,探杯要重复进行消毒和清洗。采样时动物站立保定,将探杯随吞咽动作送入食道上部10~15cm处,轻轻来回移动2~3次,然后将探杯拉出。如采集的O-P液被反刍胃内容物严重污染,要用生理盐水或自来水冲洗口腔后重新采样。
1.2.2 样品保存
将探杯采集到的8~10mL O-P液倒入25 mL以上的灭菌玻璃容器中, 容器中应事先加有8~10mL细胞培养液或磷酸盐缓冲液(0.04mol/L 、pH7.4),加盖密封后充分摇匀,贴上防水标签,并写明样品编号、采集地点、动物种类、时间等,尽快放入装有冰块的冷藏箱内,然后转往-60℃冰箱冻存。通过病原检测,做出追溯性诊断。
1.3 血清
怀疑曾有疫情发生的畜群,错过组织样品采集时机时,可无菌操作采集动物血液,每头不少于10mL。自然凝固后无菌分离血清装入灭菌小瓶中,可加适量抗菌素,加盖密封后冷藏保存。每瓶贴标签并写明样品编号,采集地点,动物种类,时间等。通过抗体检测,做出追溯性诊断。
1.4 采集样品时要填写样品采集登记表
2 样品运送
运送前将封装和贴上标签,已预冷或冰冻的样品玻璃容器装入金属套筒中,套筒应填充防震材料,加盖密封,与采样记录一同装入专用运输容器中。专用运输容器应隔热坚固,内装适当冷冻剂和防震材料。外包装上要加贴生物安全警示标志。以最快方式,运送到检测单位。为了能及时准确地告知检测结果,请写明送样单位名称和联系人姓名、联系地址、邮编、电话、传真等。
送检材料必须附有详细说明,包括采样时间、地点、动物种类、样品名称、数量、保存方式及有关疫病发生流行情况、临床症状等。
样品采集:上皮组织,最好是未破裂或新破裂的水泡皮,至少应采1克。置于pH7.2~7.4运输保存液中,冷藏(冻)保存并送检。或用食管探杯(猪用喉拭子)采集食道/咽(OP)黏液,立即按1:1加保存液后置一40~C(干冰或液氮容器)保存运输。
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