1、干木耳消毒并润湿,在超净工作台内将干耳片表面用75%酒精棉球擦拭2~3遍,用酒精棉包住耳片约2min。
2、剪取耳片组织块。用无菌剪刀将耳片四周边缘去掉,剪取远离耳基没有筋的最平部位的耳片,得到长0.5cm左右,宽0.2cm左右的组织块。
3、组织块灭菌消毒。用无菌镊子夹取该组织块在酒精灯火焰的外焰上方来回快速穿梭2~3次,每次1~2s。
4、分离培养。将组织块的1/3~1/2部位插入5mL离心管中的斜面分离培养基的中下部位之中;上述整个过程都要遵循无菌操作。将接种后的离心管插入离心管盒中(32管/盒),置于25℃恒温培养箱中培养。
5、纯化培养。分离培养5~6d后,挑取新生长出的菌丝作为接种块接种于纯化培养基中进行纯化培养。
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