细菌分离培养时的接种方法有哪些？

（一）平板划线分离法使标本或培养物中混杂的多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成菌落。一般要求单个菌落是一种细菌的纯培养。但很多情况下单个菌落并非只有一种细菌，特别是标本直接划线的开始区域生长的单个菌落分离结果不纯，一般选择菌落形成较稀少区域的单个菌落，必要时先稀释标本再划线。待菌落长出，后，挑选单个菌落，转种到另一培养基中，继续实验。平板划线法可分为以下几种：1.分区划线法此法多用于粪便等含菌量较多的标本。先将标本均匀涂于平板表面边缘一小部分（第1区）；然后烧灼接种环，将环通过第l区3～4次，连续划线（为第2区）；依次划3、4区。平板上每l区的细菌数会逐渐减少，直至分离出单个菌落（图5-4）。

2.连续划线法本法一般用于接种含菌数量相对较少的标本或培养物。先将标本均匀涂布于平板边缘一小部分，并由此开始，在平板表面连续划线并逐渐下移，直至划满平板表面。

3.棋盘格划线法此法多用于含菌量较多的临床标本，如痰、粪便等标本的初代分离培养。其优点是整个平板的3/4～4/5区域（即棋盘格范围）均为有效分离区。将标本涂布于平板约l/5处，接种环经火焰灭菌后，自原处做平行划线5～6条。接种环烧灼后冷却，划垂直线5～6条，形成正方形格；再以同法划两排斜线，使呈棋盘形。

（二）斜面接种法该法主要用于纯种增菌及保存菌种。挑取单个菌落从斜面底部自下向上划一条直线，再从底部开始向上划曲线接种，尽可能密而匀，或者直接自下而上划曲线接种。

（三）液体接种法以接种环沾取菌种，倾斜液体培养管，在液面与管壁交界处研磨接种物（以试管直立后液体应淹没接种物为准）。多用于普通肉汤、蛋白胨水等液体培养基的接种。

（四）穿刺接种法此法用于保存菌种、观察动力及某些生化反应。以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种针。其他操作与斜面接种类似。

（五）倾注平板法取纯培养物的稀释液或原标本，混匀于已融化并冷却到50℃左右15ml的琼脂管中，无菌法倾注于无菌平皿，凝固后培养，进行菌落计数。该法适用于兼性厌氧菌或厌氧菌稀释定量培养，也用于饮料、牛乳和尿液等液体标本活细菌计数