怎样用孢子分离法得到一级纯蜜环菌菌种?

　（1）菌索接种法
首先采集菌索。在夏末秋初潮湿多雨的季节，在榛树林下寻找榛树蘑。这种蘑菇的最大特征是在其菌根下土层内有蜜环菌的菌索（在菌榛上采集菌索也可以）。用无菌的培养皿把采集到的这种蜜环菌的菌装好。要选择健壮、粗、棕红色的菌索，不要选择细小、不健壮、黑色已老化的菌索。将健壮、棕红色的菌索用清水冲洗多次，用无菌水冲洗2～3次，然后用0.1%的升汞水消毒4分钟，再用无菌水冲洗2～3次，放置到无菌皿内。将菌索用无菌剪刀剪碎。
将剪碎的菌索在酒精灯下进行接菌（也叫接种）。先将接种的针放在酒精灯火焰上烧红，在火焰旁放冷，同时将有培养基的试管拔去棉塞，将管口也放在酒精灯火焰上方烧3～4秒钟，以达到灭菌目的。用无菌的接种针（环）将菌索立即移入试管斜面培养基上，将棉塞在火焰上方经过消毒，然后迅速塞好管口，不要塞得太紧，以利通气。
（2）子实体接种法
将采集的蜜环菌的子实体放入无菌平皿中，用0.1%的升汞水多洗几次，用无菌纱布吸净水珠，剥去一部分菌伞或菌柄外皮，取一小块内部组织，放在酒精灯上用接种针（或接种钩）送入到斜面培养基上，塞好棉塞。上述过程都应在无菌条件下进行。
将以上斜面试管置于25℃恒温箱中培养观察。3～5天后，如果斜面培养基上有绿色的菌丝、赤黄色菌丝、赤色菌丝等，说明有绿霉菌、黄曲霉菌、赤霉菌的感染，不能作为菌种使用，应扔掉。如果长出白色绒毛状菌丝，5～10天变成棕红色的菌索，并在黑暗处见到荧光，即是培养出来的蜜环菌试管菌种，也叫一级菌种。