石斛组织培养主要流程有哪几步？

选择生长健壮的3～6厘米长的新芽作外植体。用消了毒的利刀将新芽从母体切下，经自来水冲洗30分钟后，剥去最外面一层叶鞘，在75％的酒精中迅速蘸一下，立即放入15％次氯酸钠溶液中浸泡15分钟，或放入0.1％的升汞溶液中8～10分钟，并不时用手轻摇。取出后再剥去多余的组织，再放入5％次氯酸钠溶液中浸泡5～10分钟，取出后用无菌水冲洗数次，然后在无菌条件下剥去叶苞片，以顶芽或侧芽作为外植体接种于试管中。

将顶芽接种于KC加1毫克／升NAA的固体培养基或KC液体培养基中，而将侧芽接种于KC固体培养基中培养，控制室温26℃、光照2000勒克斯、每天光照16～24小时。液体培养基每两周要更换1次。所产生的原球茎繁殖很快，达到一定数量时应及时转入VW+（15％～50％）椰乳+（10％～20％）香蕉汁+（10％～20％）马铃薯提取液，或MS+（10％～20％）香蕉浆，或KC+（10％～20％）香蕉汁的分化培养基上，于室温20～25℃、光照2000勒克斯、日照明16～24小时的条件下促进原球茎萌发成苗。对那些只长芽、不长根的个体，可将其转入生根培养基中培养，并在生根培养基中添加少量植物生长素，如0.1毫克／升NAA等。

铁皮石斛的组织培养有以下步骤：
1、 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。

2 、茎尖培养：取铁皮石斛当年萌发的嫩茎尖，用10％次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗4~5次后接种到培养基上。研究结果表明，培养温度为25~28℃，光照度1600~2000lx，每日光照10~12h。在MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L培养基中培养30天左右，外植体则可诱导出大小不一的白色颗粒状愈伤组织，再过20天形成不定芽。将愈伤组织和不定芽切割开，再接种到MS+NAA0.2mg／L+6-BA0.5mg/L中，愈伤组织会增殖并产生不定芽，再将不定芽移到N6+10％香蕉汁中培养30天左右，则会生根长成植株。

3 、幼嫩茎段培养：剪取铁皮石斛幼嫩茎段，按常规表面灭菌，切成2.0cm左右的切段，每一切段应至少保留1个节，将其接入芽增殖培养基MS+NAA0.1~0.5mg/L+6-BA0.5~2.0mg/L。（蔗糖浓度3.0％，PH5.4~5.8，下各培养基均同）中培养。培养条件：培养温度（25±2）℃，连续光照培养，光照强度1500lx。培养30~50天后，可在节间处长出1~2个新芽。将新芽切下，再接入芽增殖培养基中继代培养，经过30天培养，在切口处长出4~6个芽，形成丛生芽簇。将丛生芽切割后，在芽增殖培养基中继续增殖培养，则可获得大量丛生芽。将上述丛生芽切割成单苗，转入壮苗培养基MS（无激素）中培养，40天后，芽可发育成高3.0cm以上并具2~3片叶的健壮无根苗。再将经过壮苗培养的无根苗，转接到生根培养基1/2MS+IBA0.1mg/L中培养40~60天，在苗基部便可长出多条肉质、绿色气生根，形成完整植株。
4、 炼苗与移栽：当试管苗有4~5片叶展开，并具有3~4条1~2cm长的根时，即可揭开瓶盖，在室内炼苗1周后，将再生植株移植于细土与牛粪（1：2）的栽培基质中，盖上薄膜，保持湿度90％以上，基质以湿润、不积水为宜，置通风阴凉处，成活率可达60％。或以碎砖4份，碎木炭1份，珍珠岩和蕨根适量组合为移栽基质，其既能透气，又能排水保水。经研究表明，铁皮石斛试管苗的出瓶移栽，在4~6月温度较高、湿度较大时的成活率最高。移栽后的小苗放在阴湿且通风地方，一周内不浇水，以防湿度过大而烂根。以后随植株生长而加强管理，则可确保铁皮石斛试管苗的成活。

　1、叶仙人掌类
　　[仙人掌科叶仙人掌属](Pereskia)
　　乔木或灌木。嫩茎微肉质，老茎木质化并被密集的刺。叶有柄，休眠期常落叶。刺座不具钩毛。花单生或集成圆锥花序。辐射对称，白、粉红或橘黄色。果实球状或梨状，肉质。种子大，黑色。全属约20种，可分2个系列：小花系列花只有1．5厘米，叶也小；大花系列花大8厘米，叶也大。
樱麒麟、叶仙人掌 
　　2、掌状仙人掌类
　[仙人掌科仙人掌属](Opuntia) 
　　茎节棍棒状或扁平，很多种类有粗大的主干。叶圆锥状或纺锤状，多数早落。刺座除着生刺、毛、花和茎节外，还有其他大多数属种没有的钩毛(芒刺)。花单生，较大且色彩鲜艳。果梨状或球状。种子很大，且有很硬的假种皮。本属是仙人掌科中的一个大属，至少有300种分布在美洲各地。 
白妙、小白毛团扇、银世界、金乌帽子、交野、龙华宝剑、宝剑、青海波、初日之出、大花团扇、千本剑、赤乌帽子 
      3、附生型仙人掌类
　　[仙人掌科量天尺属](Hylocereus)
　　节状茎，3—5棱，通常只有3棱，最长可至10米，茎部气根多。刺座稀，刺锥状，很短。花校晚开放，大漏斗状，花筒有叶状鳞片。果很大，多数红色。 
      4、量天尺
　[仙人掌科鼠尾掌属](Aporocactus)　　
　　茎极细，分枝极多，通常下垂。它是原产于热带雨林的附生类型种类，故茎上有很多气根。棱多而低。刺密生，很短。花大而多，红色，极其艳丽。 金钮、蓬莱柱、鼠尾掌、       5、康氏鼠尾掌、鞭形鼠尾掌 
[仙人掌科昙花属](Epiphyllum) 
　　分枝很多，为灌木状。茎基部因而木质化，上部扁平如叶，棱缘有圆齿或深裂。花夜晚开放，有很细的长花筒，花期极短。