1、培养基:首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。培养基的成分的不同,不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。一般细菌,如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂;做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板;链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次,倾注平板时,厚度应合适(约5-6mm),不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般细菌培养温度和时间为37℃ 12-24小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好药敏纸片的培养基先置4℃冰箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较明显的抑菌圈。
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