如何对猪精液进行稀释与保存

答：1、稀释

精液保存除了需要适当的温度外，还需要优良的稀释液。优良的稀释液可以提供给精子最理想的生存环境，保护精子细胞膜的完整性，排除对精子不良影响的因素，提供精子可以吸收的营养物质，以及在不影响精子生活力和受精力的前提下抑制精子代谢，使之处于可逆转的休眠状态。精液稀释液的主要成分中，有糖类(葡萄糖、果糖等)，提供能量;缓冲剂(柠檬酸钠、碳酸氢钠等)提供缓冲环境，等渗液(氯化钾等)提供正常的渗透压，EDTA 二钠(螯合二价阳离子)，抗生素(青霉素与链霉素等)双蒸水。水质对精子的影响很大，要求用双蒸水。

稀释液可分为短效、中效和长效，不论使用哪种稀释液，都应尽快输精，除非迫不得已。不同的公猪精液对稀释液有一定的选择性，如果1 头公猪的精液用某种稀释液效果不好时，可以考虑更换其他稀释液。短效稀释液，一般要求在 3 天内使用;中效稀释液，可保存精液 4~6 天;长效稀释液，可保存精液 7天以上。

精液稀释液要求在使用前 1 个小时配制好，这样稀释液才会有较稳定的 pH 值。稀释粉加少量双蒸水充分溶解后，再加足双蒸水的量。稀释液配好后如有杂质，就必须进行过滤。调节稀释液的 pH 值为6.8~7.4，贴好标签，注明品名、配制时间、配制人等，放入4℃冰箱保存，以备用。

稀释液量的确定方法是每头份精液的量一般要求 80~100 毫升，不能少于 70 毫升，否则将影响母猪的分娩率和窝均产仔数，特别是瘦肉型猪种。每头份精液含量总数因不同国家和不同稀释液配方，输入的总精子数也不同。一般为 20~60 亿，如果技术较熟练，可以降至 25~30 亿，但最低不能低于 10 亿。采得的原精活力应大于 0.7。用电子天平称量原精液的重量，用精子密度仪评定出精子的密度，得出本次采精获得的精子总数，得出本次采精可稀释的份数，确定需加入的稀释液的数量。

调节稀释液与精液温度一致，使两者温差在1℃以内。注意必须以精液温度为标准来调节稀释液的温度，不可逆向操作。把装在保鲜袋中的精液移入2 000~3 000 毫升塑料烧杯中，将等温的稀释液沿杯壁缓缓加入到精液中，轻轻摇匀。注意不可逆向操作，否则会导致大量的精子死亡。如需进行高倍稀释，应先从 1∶1 作低倍稀释，放置几分钟后，再将余下的稀释液缓缓加入。不能直接将所有稀释液倒入精液中，这样不利于提高精子的适应能力。精液稀释的每步操作都需进行精子活力检查，如活力下降太多，需查明原因。稀释后要求静置几分钟再做活力检查，合格后即可进行分装。分装瓶上贴好标签，注明公猪的品种、耳号、采精的日期等内容。

混合精液是指 2 头或 2 头以上公猪精液混合后输精，以期提高母猪繁殖性能。由于目前只能检查精液的品质，受精能力的评判没有生产现场实用的方法。相同精子活力的不同精液之间存在精子受精能力的不同，因此可以通过精液混合，达到提高母猪分娩率和产仔数的目的，也可提高精液处理的效率。配制混合精液时混合精液量不应超过 1 次处理的能力。倒掉所有不合格的公猪精液。新鲜精液首先按1∶1稀释，根据精子密度和混合精液的量记录需加入稀释液的量。将部分稀释后的精液放入浴锅保温。重复上述处理，将其余公猪精液处理好。计算每份精液需加入剩余部分的稀释液，将所有要混合的精液置于足够大的容器中，加入等温剩余部分稀释液。将几头公猪精液按密度稀释到最终浓度，混合之后进行分装，并且应在标签上注明是混合精液。

2、保存

精子的活动与温度有密切的关系。温度越高，精子活动就越快，存活时间就越短;相反，温度越低，精子活动就越慢，存活时间就越长。因此温度越低保存效果就越好，但是当温度降至 0~10℃时，精子就会出现冷休克而死亡。目前猪精液稀释液中没有加入抗冷休克物质，因此稀释后的猪精液温度不能低于10℃，最好不要低于 15℃，常温保存选择 17℃最佳。精液的保存应注意操作细节。稀释分装后的精液，应平放在保存箱内，这样才能增大精子沉淀后铺开的面积，减少沉淀的厚度，降低精子的死亡率。放入保存箱的精液每隔 12 小时就要轻轻摇匀 1 次，因精液放置一定的时间后，精子将沉到瓶的底部。尽量减少保存箱的开关次数，防止频繁升降温对精子造成损伤。在精液保存过程中，密切注意保存箱的温度变化，防止温度出现明显的变化。