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石斛组织培养主要流程有哪几步?

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选择生长健壮的3~6厘米长的新芽作外植体。用消了毒的利刀将新芽从母体切下,经自来水冲洗30分钟后,剥去最外面一层叶鞘,在75%的酒精中迅速蘸一下,立即放入15%次氯酸钠溶液中浸泡15分钟,或放入0.1%的升汞溶液中8~10分钟,并不时用手轻摇。取出后再剥去多余的组织,再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5~10分钟,取出后用无菌水冲洗数次,然后在无菌条件下剥去叶苞片,以顶芽或侧芽作为外植体接种于试管中。
将顶芽接种于KC加1毫克/升NAA的固体培养基或KC液体培养基中,而将侧芽接种于KC固体培养基中培养,控制室温26℃、光照2000勒克斯、每天光照16~24小时。液体培养基每两周要更换1次。所产生的原球茎繁殖很快,达到一定数量时应及时转入VW+(15%~50%)椰乳+(10%~20%)香蕉汁+(10%~20%)马铃薯提取液,或MS+(10%~20%)香蕉浆,或KC+(10%~20%)香蕉汁的分化培养基上,于室温20~25℃、光照2000勒克斯、日照明16~24小时的条件下促进原球茎萌发成苗。对那些只长芽、不长根的个体,可将其转入生根培养基中培养,并在生根培养基中添加少量植物生长素,如0.1毫克/升NAA等。